Ürünler

Eşzamanlı mutasyonların etkilerinin enzimatik aktiviteyi değiştirmek için bir araya gelme şekli kolayca tahmin edilemez çünkü bu etkiler her zaman doğrusal bir şekilde toplanmaz.Bu nedenle, substratı bağlayan amino asit kalıntılarının eş zamanlı mutasyonlarının etkilerinin karakterizasyonu, enzimlerin substrat özgüllüğünün anlaşılmasına önemli bir katkı sağlayabilir.Spodoptera frugiperda'dan (Sfbetagly) elde edilen beta-glikosidazda, hem Q39 hem de E451 kalıntıları, substrat ile etkileşime girer ve bu, substrat özgüllüğünü tanımlamak için esastır.Sfbetagly'nin çift mutantları (A451E39, S451E39 ve S451N39), bölgeye yönelik mutajenez ile hazırlandı, bakterilerde ifade edildi ve afinite kromatografisi kullanılarak saflaştırıldı.Bu enzimler, substrat olarak p-nitrofenil beta-galaktozit ve p-nitrofenil beta-fukozit kullanılarak karakterize edildi.Q39 ve E451 pozisyonlarında sahaya yönelik mutasyonlar içeren Sfbetagly'nin tek ve çift mutantları için k cat/Km oranı, çift mutasyonların (Gdouble) ESdouble dagger'ın (enzim geçiş durumu kompleksi) serbest enerjisi üzerindeki etkisinin olduğunu göstermek için kullanıldı. daggerxy), tekli mutasyonlardan (Gdouble daggerx ve Gdouble daggery) kaynaklanan etkilerin toplamı değildir.Gdouble hançerdeki bu fark, tekli mutasyonların etkilerinin kısmen örtüştüğünü gösterir.Bu nedenle, bu ortak etki Gdouble daggerxy'de yalnızca bir kez sayılır.Beta-glikosidazlar üzerindeki kristalografik veriler, Q39 ve E451 kalıntılarını ve substratın aynı hidroksil grubunu içeren iki dişli bir hidrojen bağının varlığını ortaya koymaktadır.Bu nedenle, hem termodinamik hem de kristalografik veriler, Q39 ve E451 kalıntılarının, substrat ile ilgili etkileşimleri üzerinde karşılıklı bir etki sergilediğini göstermektedir.