Ürünler

Antranilik asit ve flüoresan algılama ile türevlendirmeye dayalı glikosiltransferazlar için yeni yüksek performanslı sıvı kromatografi testi.

Testler, yüksek performanslı sıvı ile hem β1-4 galaktosiltransferaz (GalT-1) hem de α2-6 sialiltransferaz (ST-6) aktivitelerini ölçmek için 2-aminobenzoik asidin (2AA; antranilik asit, AA) benzersiz etiketleme kimyası kullanılarak geliştirilmiştir. floresan tespitli kromatografi (HPLC) (Anumula KR. 2006. Glikoprotein karbonhidratların yüksek performanslı sıvı kromatografik analizi için floresan türevlendirme yöntemlerindeki gelişmeler. Anal Biochem. 350:1-23).GalT-1 ve ST-6 için alıcılar olarak N-Asetilglukozamin (GlcNAc) ve N-asetillaktozamin ve vericiler olarak sırasıyla üridin difosfat (UDP)-galaktoz ve sitidin monofosfat (CMP)-N-asetilnöraminik asit (NANA) kullanıldı.Enzimatik ürünler yerinde AA ile etiketlendi ve normal faz koşulları kullanılarak TSKgel Amid 80 kolonunda substratlardan ayrıldı.Enzim birimleri, eş zamanlı olarak türetilmiş standartlar Gal-β1-4GlcNAc ve NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc ile karşılaştırılarak pik alanlarından belirlendi.Deneyler için doğrusallık (zaman ve enzim konsantrasyonu), kesinlik (tahlil içi ve tahliller arası) ve tekrar üretilebilirlik belirlenmiştir.Deneylerin, izolasyon ve saflaştırma sırasında enzim aktivitelerinin izlenmesinde faydalı olduğu bulundu.Tahliller oldukça hassastı ve geleneksel radyoaktif şeker bazlı ölçümlere eşit veya onlardan daha iyi performans gösterdi.Tahlil formatı, karbonhidrat akseptörlerinin etiketleme için bir indirgeyici uç içermesi şartıyla, diğer transferazların aktivitesini ölçmek için de kullanılabilir.IgG kullanılarak glikoprotein alıcıları için bir deney geliştirildi.GalT-1 ve ST-6 aktivitelerinin hızlı bir şekilde belirlenmesini kolaylaştıran IgG glikanlarının (iki antenli G0, G1, G2, mono- ve disialile) ayrılması için kısa bir HPLC profilleme yöntemi geliştirilmiştir.Ayrıca, bu profil oluşturma yöntemi, klinik ortamlarda IgG glikanlarındaki değişikliklerin izlenmesi için yararlı olmalıdır.