Çevremizde sıradan gibi görünen ama aslında sessizce bize çok şey katan birçok isimsiz kahraman var.Proteinaz K, endüstrideki "büyük ve güçlü" ile karşılaştırıldığında, moleküler teşhis endüstrisinde "isimsiz kahraman"dır, proteinaz K o kadar önemsizdir ki, önemini uzun zamandır gözden kaçırmışızdır.Yeni taç salgınının patlak vermesiyle, proteinaz K'ya olan talep arttı ve yurtiçi ve yurtdışındaki arz, tüketimin çok gerisinde kaldı ve herkes bir anda proteinaz K'nın ne kadar önemli olduğunu anladı.
proteinaz k ne işe yarar
Proteinaz K, proteolitik enzim aktivitesine sahip bir serin proteazdır ve çok çeşitli ortamlarda (pH (4-12.5), yüksek tuz tamponu, 70°C'lik yüksek sıcaklık, vb.) aktiviteyi koruyabilir.Ayrıca proteinaz K'nın aktivitesi SDS, üre, EDTA, guanidin hidroklorür, guanidin izotiyosiyanat vb. ), gıda (et yumuşatma), deri (saç yumuşatma), şarap yapımı (alkol arıtma), amino asit hazırlama (bozunmuş tüyler), nükleik asit ekstraksiyonu, in situ hibridizasyon vb., proteinaz K uygulamaları vardır.En sık kullanılan uygulama nükleik asit ekstraksiyonudur.
Proteinaz K, nükleik asitlere sıkıca bağlı olan histonlar da dahil olmak üzere numunedeki her türlü proteini enzimolize edebilir, böylece nükleik asitler numuneden salınabilir ve ekstraksiyon ve saflaştırmanın bir sonraki adımını kolaylaştırarak ekstrakt içine salınabilir.Viral nükleik asidin saptanmasında proteinaz K, virüs örnekleme solüsyonundaki önemli bileşenlerden biridir.Proteinaz K, taşıma ve tespit aşamasında daha güvenli olan virüsün kaplama proteinini kırabilir ve etkisiz hale getirebilir;ayrıca proteinaz K, RNaz'ı da bozabilir, viral RNA'nın bozulmasını önler ve nükleik asit tespitini kolaylaştırır.
Proteinaz K'nın bir gecede ünü
Bilimsel araştırma alanında veya IVD alanında, nükleik asit ekstraksiyonu en temel deneydir, bu nedenle proteinaz K her zaman çok önemli bir varlık olmuştur.Bununla birlikte, geçmişte proteinaz K, rolünden çok daha az biliniyordu.Bunun büyük bir kısmı, proteinaz K'nın arz ve talep ilişkisinin çok kararlı olmasından kaynaklanıyordu.Çok az insan proteinaz K tedarikinin bir sorun olacağını düşünür.
Yeni taç salgınının patlak vermesiyle, nükleik asit testine olan talep arttı.Haziran 2020'nin sonları itibarıyla Çin, yaklaşık 90 milyon yeni taç testini tamamladı ve bu sayı küresel ölçekte daha da endişe verici.Nükleik asit ekstraksiyon deneylerinde, proteinaz K'nın çalışma konsantrasyonu yaklaşık 50-200 μg/mL'dir.Genel olarak, bir nükleik asit örneğini çıkarmak için yaklaşık 100 μg proteinaz K gerekir.Fiili kullanımda, nükleik asit ekstraksiyonunun etkinliğini arttırmak için genellikle Proteinaz K artan bir miktarda kullanılacaktır.Yeni koronavirüsün nükleik asit tespiti, büyük miktarda proteinaz K talebini beraberinde getirdi.Proteinaz K'nın orijinal arz ve talep dengesi hızla bozuldu ve proteinaz K, bir gecede önemli bir salgın önleme malzemesi haline geldi.
Proteinaz K üretimindeki zorluklar
Salgının gelişmesiyle birlikte proteinaz K'nın önemli değeri insanlar tarafından değer görse de, proteinaz K'nın aşırı düşük anahtar değeri nedeniyle proteinaz K üretimine az sayıda yerli şirketin dahil olması utanç vericidir. proteinaz K üretimini kurmak istiyor Üretim sürecinde, proteinaz K'nin son derece özel bir protein olduğu keşfedildi.Proteinaz K'nın üretim kapasitesini kısa sürede genişletmek son derece zordur.
Büyük ölçekli proteinaz K üretimi aşağıdaki zorluklarla karşı karşıyadır:
1. Düşük ifade
Proteinaz K, çoğu proteini non-spesifik olarak bozabilir ve ekspresyon konakçı hücresinde ciddi toksisiteye neden olabilir.Bu nedenle, proteinaz K'nın ekspresyon seviyesi genellikle çok düşüktür.Proteinaz K'yı yüksek oranda eksprese eden ekspresyon sistemlerinin ve suşların taranması genellikle daha uzun bir döngü gerektirir.
2. Pigment ve nükleik asit kalıntıları
Büyük ölçekli fermantasyon, büyük miktarda pigment ve konakçı nükleik asit kalıntılarını ortaya çıkarır.Bu safsızlıkları basit bir saflaştırma işlemi ile uzaklaştırmak zordur ve karmaşık saflaştırma maliyeti artırır ve geri kazanım oranını düşürür.
3. İstikrarsızlık
Proteinaz K yeterince kararlı değildir, kendi kendini enzimolize edebilir ve koruyucu bir madde olmadan 37°C'de uzun süre stabil bir şekilde saklanması zordur.
4. Çökelmesi kolay
Dondurularak kurutulmuş proteinaz K tozunu hazırlarken, dondurularak kurutulmuş tozdaki proteinaz K'nın katı içeriğinin büyük olmasını sağlamak için, yüksek konsantrasyonda dondurularak kurutulmuş bir koruyucu madde eklemek gerekir, ancak ne zaman proteinaz K konsantrasyonu 20mg/mL ve üstüne ulaşır, bu kolaydır Agregasyon bir çökelti oluşturur, bu da yüksek katı içerikli proteinaz K'nin dondurularak kurutulmasına büyük zorluklar getirir.
5. Büyük yatırım
Proteinaz K, güçlü proteaz aktivitesine sahiptir ve laboratuvarda diğer proteazları hidrolize edebilir.Bu nedenle proteinaz K, araştırma, geliştirme ve üretim için özel üretim alanları, ekipman ve personel gerektirir.
XD BIOCHEM'in proteinaz K solüsyonu
XD BIOCHEM has a mature protein expression and purification platform, and has rich experience in the expression and purification of recombinant proteins and optimization of production processes. Through the rapid formation of a research and development team, the large-scale production process of proteinase K has been overcome. The monthly output of freeze-dried powder is more than 30 KG. The product has stable performance, high enzyme specific activity, and no host cytochrome and nucleic acid residues. Welcome to contact XD BIOCHEM Obtain a trial package (E-mail: sales@xdbiochem.com Tel: +86 513 81163739).
XD BIOCHEM'in teknik çözümleri şunları içerir:
Çok kopyalı plazmid entegrasyonu kullanılarak, proteinaz K'nın düşük ifade seviyesi probleminin üstesinden gelen, 8 g/L ekspresyon seviyesine sahip yüksek ekspresyon suşları seçilir;
Çok adımlı bir saflaştırma işleminin oluşturulması yoluyla, proteinaz K'nın konakçı sitokrom ve nükleik asit kalıntıları, standart değerin altında başarılı bir şekilde çıkarıldı;
Koruyucu tampon formülasyonlarının yüksek verimli taraması yoluyla, proteinaz K'yı 37°C'de stabil bir şekilde depolayabilen bir tampon seçildi;
Tarama tamponları, proteinaz K'nin yüksek konsantrasyonlarda toplanması ve çökelmesi sorununun üstesinden gelir ve proteinaz K'nin yüksek katı içerikli dondurarak kurutması için temel oluşturur.
XD BIOCHEM proteinaz K örneği
XD BIOCHEM proteinaz K stabilite testi: oda sıcaklığında 80 gün sonra aktivitede önemli bir değişiklik olmaz
XD BIOCHEM proteinaz K stabilite testi: oda sıcaklığında 80 gün sonra aktivitede önemli bir değişiklik olmaz
XD BIOCHEM proteinaz K ve rakip ürünlerin nükleik asit ekstraksiyon etkisinin karşılaştırılması.Nükleik asit ekstraksiyonu sürecinde sırasıyla XD BIOCHEM ve rekabetçi proteinaz K kullanılır.XD BIOCHEM proteinaz K'nin ekstraksiyon etkinliği daha yüksektir ve hedef genin Ct değeri daha düşüktür.
Gönderim zamanı: 31 Aralık 2021