Ürünler

Protein fosforilasyonu, çeşitli hücresel fonksiyonları düzenler ve bitkilerin erken gelişmesinde önemli bir rol oynar.Arabidopsis fidelerinde protein fosforilasyonuna ilişkin önceki araştırmaları tamamlamak ve genişletmek için, denatüre olmayan koşullar altında protein ekstraksiyonunu, Rubisco-tükenmiş ekstraktlardaki bozulmamış fosfoproteinlerin immobilize metal-iyon afinite kromatografisi (IMAC) zenginleştirmesi ve ardından tanımlama ile birleştiren alternatif bir yaklaşım kullandık. iki boyutlu jel elektroforezi (2-DE) ve sıvı kromatografi-tandem kütle spektrometrisi (LC-MS/MS) kullanılarak.Jel içi tripsin sindirimi ve seçilen jel noktalarının analizi, PhosPhAt 4.0 ve P3DB Arabidopsis thaliana fosforilasyon bölgesi veritabanlarında yalnızca 18 fosfopeptit ve 8 fosfot bulunan 144 fosforile peptit ve tortu tanımladı.Tanımlanmış 82 fosfoproteinin yarısından fazlası karbonhidrat metabolizması, fotosentez/solunum veya oksidatif stres tepkisi mekanizmalarında yer almıştır.Bozulmamış fosfoproteinlerin 2-DE ve LC-MS/MS'den önce zenginleştirilmesinin, peptit düzeyinde zenginleştirmeyi kullanan yöntemlerle karşılaştırıldığında fosforile edilmiş treonin ve tirozin kalıntılarının saptanmasını geliştirdiği görülüyor, bu da iki yaklaşımın fosforilasyon alanı kapsamı açısından bir şekilde tamamlayıcı olduğunu düşündürüyor.Genç fideler için sonuçların daha önce olgun Arabidopsis yaprakları için elde edilen sonuçlarla karşılaştırılması, bu dokularda farklı şekilde fosforile edilmiş beş protein tanımladı ve bu tekniğin, bitki gelişimi sırasında protein fosforilasyonu dinamiklerini araştırmak için potansiyelini gösterdi.