Ürünler

Kolikin E1 kanal bölgesinin zar topolojisi, floresan rezonans enerji transferi (FRET) ile incelenmiştir.FRET, donör olarak genetik olarak kodlanmış bir flüoresan amino asidi (kumarin) ve FRET alıcısı olarak DABMI (4-(dimetilamino)fenilazofenil-4'-maleimid) ile bağlanmış seçici olarak etiketlenmiş bir sistein tortusunu içermiştir.Floresan kumarin tortusu, kolisin kanal alanı içindeki herhangi bir bölgeye seçici dahil edilmeye izin veren ortogonal bir tRNA/aminoasil-tRNA sentetaz çifti yoluyla proteine ​​dahil edildi.Her varyant, kumarin birleşmesi için bir stop (TAG) mutasyonu ve DABMI bağlanması için bir sistein (TGT) mutasyonu barındırıyordu.Helisler 1-6 içindeki altı sarmal mesafe, hem çözünür hem de zara bağlı durumlar için FRET analizi kullanılarak belirlendi.FRET verileri, kanal alanının zara bağlı yapısına yeni bir bakış açısı sağlayan zar birleşimi üzerine sarmallar 3-6 arasındaki sarmallar arası mesafelerde büyük değişiklikler gösterdi.Genel olarak, kumarin-DABMI FRET sarmallar arası verimlilikleri, kolisin kanalı için şemsiye modeli temel alarak zar bağlanması üzerine azaldı.Mevcut ve daha önce yayınlanmış FRET verilerine dayanarak kanal alanının kapalı durumu için geçici bir model geliştirildi.Model, sarmal 1-7'nin hücre dışı taraftan saat yönünde dairesel düzenlemesini ve sarmallar 1, 6, 7 ve 10'un sarmallar 8 ve 9 tarafından oluşturulan merkezi transmembran saç tokası etrafında zar arayüzey ilişkisini önerir.