Ürünler

X-gal (ayrıca 5-bromo-4-kloro-3-indolil-β-D-galaktopiranosit için kısaltılmış BCIG), ikame edilmiş bir indole bağlı galaktozdan oluşan organik bir bileşiktir.Bileşik, 1964'te Jerome Horwitz ve işbirlikçileri tarafından sentezlendi. Resmi kimyasal adı genellikle daha az doğru ama aynı zamanda bromokloroindoksil galaktosid gibi daha az hantal ifadelere kısaltılır.İndoksilden gelen X, X-gal kontraksiyonundaki X'in kaynağı olabilir.X-gal genellikle moleküler biyolojide, olağan hedefi olan bir β-galaktozid yerine bir enzim olan β-galaktosidazın varlığını test etmek için kullanılır.Ayrıca histokimya ve bakteriyolojide bu enzimin aktivitesini tespit etmek için kullanılır.X-gal, enzim katalizli hidrolizin bir sonucu olarak indigo boyasına benzer çözünmez mavi bileşikler veren birçok indoksil glikozit ve esterden biridir.

X-gal bir laktoz analoğudur ve bu nedenle D-laktozdaki β-glikosidik bağı parçalayan β-galaktosidaz enzimi tarafından hidrolize edilebilir.X-gal, β-galaktosidaz tarafından bölündüğünde galaktoz ve 5-bromo-4-kloro-3-hidroksiindol-1 verir. İkincisi daha sonra kendiliğinden dimerize olur ve 5,5'-dibromo-4,4'-dikloro'ya oksitlenir -indigo - 2, çözünmeyen yoğun mavi bir ürün.X-gal'in kendisi renksizdir, dolayısıyla mavi renkli ürünün varlığı, aktif β-galaktosidazın varlığı için bir test olarak kullanılabilir.Bu aynı zamanda bakteriyel β-galaktosidazın (lacZ olarak adlandırılır) çeşitli uygulamalarda bir raportör olarak kullanılmasına izin verir.

İki hibrit analizde, β-galaktosidaz, birbiriyle etkileşime giren proteinleri tanımlamak için bir raportör olarak kullanılabilir.Bu yöntemde, genom kütüphaneleri, maya veya bakteri sistemi kullanılarak protein etkileşimi için taranabilir.Taranmakta olan proteinler arasında başarılı bir etkileşim olduğunda, bu, bir aktivasyon alanının bir promotöre bağlanmasıyla sonuçlanacaktır.Promotör bir lacZ genine bağlıysa, X-gal varlığında mavi pigmentli kolonilerin oluşumuyla sonuçlanan β-galaktosidaz üretimi bu nedenle proteinler arasında başarılı bir etkileşimi gösterecektir.Bu teknik, boyutu yaklaşık 106'dan küçük olan tarama kitaplıklarıyla sınırlı olabilir. X-gal'in başarılı bir şekilde ayrılması, indolün buharlaşmasından dolayı fark edilir derecede kötü bir koku da yaratır.

X-gal'in kendisi renksiz olduğundan, mavi renkli ürünün varlığı, aktif bir β-galaktosidazın varlığı için bir test olarak kullanılabilir.

Aktif bir enzimin bu kolay tanımlanması, βgalaktosidaz geninin (lacZ geni) çeşitli uygulamalarda bir raportör gen olarak kullanılmasına izin verir.