Ürünler

Son zamanlarda, piren nükleotidinin tercihen abazik bir sitenin, bir timin dimerinin 3'-T'sinin ve maya DNA polimeraz eta (pol eta) tarafından en zarar görmemiş bazların karşısına yerleştirildiğini bildirdik.Piren, H-bağlama yeteneği olmayan polar olmayan bir molekül olduğu için, dPMP yerleştirmenin olağandışı yüksek verimlilikleri, üstün baz istifleme kabiliyetine atfedilir ve nükleotitlerin poleta ile seçiminde baz istiflemenin öneminin altını çizer.Pol eta ile nükleotidlerin seçiminde H-bağı ve baz çifti geometrisinin rolünü araştırmak için, bazla modifiye edilmiş nükleotidler 2,6-diaminopurin, 2-aminopurin, 6-kloropurin ve inosinin ekleme etkinliklerini belirledik. baz çifti geometrisine bağlı olarak şablon tabanı ile farklı sayıda H-bağı yapın.Watson-Crick baz eşleşmesinin, Watson-Crick H-bağlarının sayısındaki azalma ve artan bağ sayısı ile nispi yerleştirme verimlerindeki azalma ile kanıtlandığı gibi, C ve T'nin karşısına yerleştirme için nükleotid analoglarının seçiminde önemli bir rol oynadığı görülmektedir. donör-donör ve alıcı-alıcı etkileşimlerinin sayısı.Nükleotit yerleştirmenin seçiciliği, 5'-T'nin 3'-T'den daha sert tutulduğunu öne süren önceki çalışmaya uygun olarak, timin dimerinin 3'-T'sine göre 5'-T'nin karşısında daha fazladır.Ayrıca, A'nın dimerin her iki T'sinin karşısına yerleştirilmesine, A ve 7-deaza-A'nın hemen hemen aynı yerleştirme etkinliklerine dayanan Hoogsteen baz çifti tarafından değil, Watson-Crick baz çifti aracılık ediyor gibi görünmektedir; ikincisi H-'den yoksundur. N7'de yapıştırma kapasitesi.Watson-Crick baz çiftlerini oluşturabilen nükleotitlerin eklenmesine yönelik nispi verimlilikler, Klenow fragmanına paraleldir, oysa Klenow fragmanı, daha büyük şekil seçiciliği ile uyumlu olarak uyumsuzluklara karşı daha güçlü bir şekilde ayrım yapar.Bu sonuçlar, hem poleta hem de Klen ow fragmanı tarafından nükleotitlerin seçiminde H-bağı ve Watson-Crick baz çifti geometrisinin önemini ve daha açık ve daha az olması nedeniyle poleta tarafından yerleştirmede şekil seçiminin daha az rolünü vurgulamaktadır. kısıtlı aktif site.