Ürünler

5-florourasil (5-FU) ve iki endojen monofosfat nükleotidin birkaç metabolitini spesifik olarak ölçmek için sıvı kromatografi-tandem kütle spektrometrisine (LC-MS/MS) dayalı orijinal bir yöntem geliştirdik.Bu deney, (i) 5-fluoro-2'-deoksiüridin-5'-monofosfatın (5-FdUMP) 5-FU veya 5-fluoro-2'-deoksiüridinden (5-FdUrd) hücre içi üretiminin belirlenmesine olanak sağlamıştır. , (ii) 5-FdUMP konsantrasyonunun hücre içi 2'-deoksiüridin-5'-monofosfat (dUMP)/timidin-5'-monofosfat (TMP) oranı üzerindeki etkisi ve (iii) 5-FdUMP'nin salgılanma kapsamı ve ABC taşıyıcıları tarafından kültürlenmiş insan hücrelerinden 5-FU.Deney koşullarımız altında hücreler, 5-FU veya 5-FUrd ile inkübe edildi.Daha sonra, hücresel proteinler metanol ile çökeltildi.Bu prosedür, yüksek ekstraksiyon geri kazanımı sağlamıştır.Ek olarak, hücrelerden 5-FU ve 5-FdUMP salgılanmasını ölçmek için, bu moleküllerin kültür ortamında miktarını belirledik.Ortam ya doğrudan enjekte edildi (5-FU) ya da Oasis Wax ekstraksiyon kartuşu (5-FdUMP) kullanılarak bir katı faz ekstraksiyonuna tabi tutuldu.Analitlerin ayrılması, mobil faz olarak amonyum format tamponu/metanol/su (5/5/90, v/v) kullanılarak izokratik mod ile bir dC18 Atlantis 3.5 um, (100 mm x 2.1 mm id) kolon üzerinde gerçekleştirildi.Çalışma süresi 6,2 dakikayı geçmedi.Analitler, negatif iyon modu altında bir elektrosprey arayüzünde iyonize edildi.Bileşiklere göre yöntemi 2,5–150 ng mL-1 aralığında doğruladık.Test içi ve testler arası değişkenlik, yedi gün boyunca %10'un altındaydı.Numuneler en az iki hafta boyunca -20 °C'de saklandığında ve üç donma-çözülme döngüsünden sonra tüm bileşikler hücrelerde veya kültür ortamında stabildi.Her iki ortamda da matriks etkisi gözlenmedi.